蜜中抗生素的含量測(cè)定

由于生活水平的提高，蜂蜜常常成為人們關(guān)注的對(duì)象。更加流行。它不但是很好的天然營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還具有護(hù)膚，潤(rùn)肺和消化作用。為了預(yù)防蜂病，養(yǎng)蜂人經(jīng)常使用多種抗生素(氯霉素、鏈霉素、四環(huán)素、土霉素、金霉素、青霉素等)對(duì)蜂病進(jìn)行治療。

一、蜂蜜中常見抗生素殘留研究

（一）氯霉素

由于它具有高效、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于蜂病的防治。近年來，歐盟、美國(guó)等發(fā)達(dá)國(guó)家禁止在動(dòng)物性食品中添加氯霉素，并明確規(guī)定不能檢測(cè)出氯霉素的殘留量。中國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布了相關(guān)公告，明確禁止氯霉素的使用。

（二）氨基糖苷類

抗生素廣泛應(yīng)用于動(dòng)物養(yǎng)殖，鏈霉素是主要的抗生素，但長(zhǎng)期使用易產(chǎn)生耐藥性，對(duì)耳、腎等器官造成嚴(yán)重?fù)p傷?？咕卦诖禾斓拿墼粗胁⒉怀Ｒ?。夏季，中國(guó)養(yǎng)蜂人已經(jīng)習(xí)慣使用I1抗生素。歐盟、美國(guó)等國(guó)家和地區(qū)的食品中，氨基糖苷類抗生素含量不超過100mg/kg~。

（三）磺胺類藥物

磺胺類作為一種常用抗生素，在蜂群傳染病的防治中發(fā)揮著重要作用，但其不良反應(yīng)非常嚴(yán)重。硫磺胺類藥物主要通過肝臟發(fā)生代謝失活，形成乙?；x產(chǎn)物，排出尿液。但其代謝產(chǎn)物溶解度低，易沉淀于尿中，造成尿道損傷，并可引起血尿、結(jié)晶尿和腎損害。任何一種磺胺類藥物，如總磺胺二甲雙胍，其總含量均不得超過100ug·kg-1，歐美國(guó)家也是如此。

（四）硝基呋喃

硝基呋喃是一種人工合成的廣譜抗生素，對(duì)細(xì)菌、真菌和原生動(dòng)物都有效。它們能破壞引起蜜蜂感染的細(xì)菌的新陳代謝，殺死它們。硝基呋喃類抗生素以呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等為主，但硝基呋喃類抗生素對(duì)人體有潛在危害，已被禁用。

（五）其它抗生素

蜂蜜中還含有異丙氨酸、大環(huán)脂、羥基甲醛、磷霉素等成分?？股貧埩暨M(jìn)入人體后會(huì)產(chǎn)生很大的副作用，因此歐盟國(guó)家對(duì)其進(jìn)行了嚴(yán)格限制。蜂產(chǎn)品抗生素殘留的檢測(cè)方法主要有微生物法、理化法、免疫法等。它是生物傳感器和生物芯片。

二、蜜中抗生素的含量測(cè)定

（一）微生物檢測(cè)

該方法可以根據(jù)抗菌藥的生理功能和代謝規(guī)則，定性或定量地測(cè)定抗菌藥的殘留量，特別包括三苯基三醇氯化物法（TTC法）、圓盤法（PD法）、管小盤法（PD法）等。操作方便，但也存在操作時(shí)間長(zhǎng)。四小時(shí)內(nèi)，PD的檢出限為0.01~0.008iu·ML~(-1)，可達(dá)到檢測(cè)目的。紙切法成本低，時(shí)間長(zhǎng)，檢測(cè)結(jié)果易出現(xiàn)假陽性，需要對(duì)陽性物質(zhì)進(jìn)行后處理，以確定是否是待測(cè)抗生素。管碟方法是基于擴(kuò)散的并行量化方法，采用管碟法對(duì)生物抗生素進(jìn)行效價(jià)測(cè)定和效價(jià)分析。由于它的準(zhǔn)確度高、直觀性、重現(xiàn)性好，因此得到了廣泛的應(yīng)用。但是，在整個(gè)檢測(cè)過程中，決定測(cè)試結(jié)果的主要原因很多。分別不適當(dāng)或不注意的手術(shù)會(huì)導(dǎo)致重大錯(cuò)誤，導(dǎo)致整個(gè)測(cè)試組失敗。結(jié)果表明，微生物管碟法檢測(cè)周期長(zhǎng)，操作復(fù)雜，誤差大，但靈敏度高，HPLC檢測(cè)簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，但靈敏度低。傳統(tǒng)的抗菌藥物檢測(cè)方法均采用微生物法，該方法成本低，可在一般實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行操作。但其缺點(diǎn)是：(1)色彩判斷時(shí)間過長(zhǎng)；(2)肉眼識(shí)別色態(tài)判斷容易出現(xiàn)錯(cuò)誤，偏紅判斷要準(zhǔn)確；(3)操作復(fù)雜。因此，傳統(tǒng)的抗生素殘留微生物檢測(cè)方法已經(jīng)基本被淘汰。國(guó)際上一些大的生物公司對(duì)傳統(tǒng)的微生物檢測(cè)方法進(jìn)行了改進(jìn)，開發(fā)了一種快速檢測(cè)工具。結(jié)論本方法靈敏度高，準(zhǔn)確度準(zhǔn)確，適用于0.5~1H范圍。

（二）理化檢驗(yàn)方法

采用HPLC,CC,LC-MS,GC-MS等儀器分析方法對(duì)蜂蜜中抗生素殘留進(jìn)行檢測(cè)(T8~14)。該方法具有靈敏度高，精度高，無誤判等優(yōu)點(diǎn)，但設(shè)備昂貴，操作專業(yè)，操作繁雜，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，成本高，難以適應(yīng)目前設(shè)備高速、大型、簡(jiǎn)單的現(xiàn)狀。由于蜂蜜中含有一定量的蛋白質(zhì)、脂肪和纖維成分，如果不加以處理，就會(huì)直接影響到進(jìn)樣結(jié)果，從而對(duì)色譜柱造成很大的破壞。樣品應(yīng)充分混合，萃取提純，高速離心脫除纖維等雜質(zhì)。經(jīng)過精制的柱子注射，用HPLC-UV分光光度法測(cè)定蜂蜜中磺胺類藥物殘留，回收率為88.00%~111.17%，線性相關(guān)系數(shù)r>0.9998，測(cè)定蜂蜜中磺胺噻唑的含量為0.05mg·L~(1)，測(cè)定磺胺二甲氧嘧啶的含量為0.10mg·L~(1)，測(cè)定蜂蜜中四環(huán)素的含量為0.10mg·L~(1)。四環(huán)素檢測(cè)限為15ug·L-，定量檢測(cè)限為25ug·kg-。產(chǎn)率在78.85%~82.58%之間，變異系數(shù)不超過15%；樣品的分離采用固相萃取法和反相液相色譜法。RSD<10%，日間RSD<15%，平均回收率在60%~130%之間。由于樣品預(yù)處理的復(fù)雜性，理化檢測(cè)方法準(zhǔn)確可靠，但不適合現(xiàn)場(chǎng)大量樣品的初始篩和高速檢測(cè)。因此，初次篩選后可以通過理化試驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證測(cè)試。

三、結(jié)語

該方法操作簡(jiǎn)便、快速、設(shè)備成本低、檢測(cè)成本低、專一性強(qiáng)，且需專業(yè)人員操作，樣品產(chǎn)量大。由于適合大型樣品的初步檢驗(yàn)，所以很多企業(yè)采用氯化抗生素、連鎖抗生素、硝基弗蘭、四環(huán)素、磺胺等。因此，對(duì)動(dòng)物性食品中抗生素殘留進(jìn)行檢測(cè)具有很大潛力，是未來免疫分析的發(fā)展方向之一。如果抗生素殘留超標(biāo)，不僅會(huì)給人營(yíng)養(yǎng)，而且會(huì)無意識(shí)地危害人類的健康。藥物殘留是影響人體健康的一個(gè)重要因素，它也是目前科研中的熱點(diǎn)與難點(diǎn)。

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